国产精品人成-国产精品热久久毛片-国产精品热久久-国产精品区一区二区三-丝袜模特-丝袜美腿一区二区

除了個別在PAGE膠上利用熒光或者酶活性直接做類似Western反應的“前衛”方法，印跡法的常規主流，無論是Southern、Northern還是Western Blot，都需要將電泳結果轉印到膜上固定，再進行顯色顯影反應。對于各種Blot來說，作為承載實驗結果的載體，包括各類斑點雜交或者克隆轉印，膜的選擇就顯得很重要。

    德國老牌的廠家Schleicher & Schuell是世界*個生產硝酸纖維素膜的廠家，其產品標準即為同類產品的行業標準，產品質量毋庸置疑，去年被對手之一的Whatman收購而成為Whatman旗下產品。不過由于這個牌子的產品品種頗多，初次選擇時不免讓人眼花繚亂，上海力敏小編在這里特別介紹一下，便于大家選擇。

PVDF膜

    Westran S：很高的蛋白質結合效率和載量，即使很劇烈的反復洗滌條件也不影響目標蛋白結合。0.2μm小孔徑，防蛋白質滲漏。zui重要的是，PVDF膜化學性質穩定，可以兼容測序----將蛋白條帶剪下可以直接去N端測序。如果需要做蛋白質測序，PVDF是*選擇。

    Westran Clear Signal：和小S的區別是孔徑，這個是0.45μm，其他特性一樣，專為蛋白質Western用的。由于孔徑大，轉移速度也比較快，截留的背景更少，信號就更清晰。CS可以兼容常規的蛋白燃料，比如麗春紅，氨基黑，靠馬斯亮藍染色。

    PVDF膜用前需要“飄在”甲醇液面浸潤（通風櫥操作），然后才能進行下一步。轉移方法適用于半干轉或者電轉，其他不適合。而固定的方法主要采用干燥固定。顯色，包括化學發光法和同位素，化學顯色法，都適合PVDF膜。

硝酸纖維素膜：
    Protran：純的硝酸纖維素膜。在所有膜中，Protran膜的封閉zui簡單容易，從而可有效阻斷非特異結合，降低背景，無需嚴謹清洗即可得到良好的信噪比；廣泛適用于同位素、化學發光法、顯色法和熒光法等不同的標記顯色方法，適用于包括Southern，Northern，Western Blot在內的多種實驗。對于基于HRP的化學發光法印跡反應，效果尤佳。不過，由于是純硝酸纖維素膜，比較脆，操作上要特別注意。Protran孔徑分為0.45μm；0.2μm；0.1μm這3種。0.45μm膜通常適用于分子量大于20KD的蛋白分子和300bp以上大小的核酸；而0.2μm膜則由于密度大孔徑小能有效減少“滲漏”，更適用于分子量小于20KD的蛋白質分子，包括300bp以下的短鏈DNA或者寡核苷酸。而0.1μm膜則是用來對付7KD以下的蛋白質小家伙們的。如果你的實驗中的小分子蛋白質Western Blot老做不好（比如EGF），大概有可能就是膜的孔徑不夠小，漏掉拉（當然電泳Buffer不用甘氨酸也是竅門之一）。硝酸纖維素膜不需要甲醇預先浸潤，用前直接鋪在在水面滲透潤濕后就可以使用。Protran的另外一個小小優點是非常穩定，5年前保存Western Blot的實驗結果在歷時5年后再次做顯色反應，依然能正確顯色。雖說需要重復用到5年前結果的，好像很少見，但能說明其性質穩定，可保存蛋白質。

    在操作上，除了小心之外，Protran硝酸纖維素膜適用于常規電轉、半干轉、真空轉、毛細轉移，但不適合用堿法。固定方法，如果樣本是核酸，可以用紫外交聯或者80度烘干固定，蛋白質則只需要干燥固定即可。Protran適用于各種通用的顯色方法如化學顯色，化學發光，同位素和熒光法。

    Optitran：夾心的硝酸纖維素膜，中間的聚酯基質兩面均勻覆蓋硝酸纖維素，使得該種膜具有硝酸纖維素膜的所有優點同時兼具強韌性，特別適合需要反復操作的實驗，比如需要多次重復標記雜交和重復洗脫的實驗----有時候對同一個電泳結果需要Western檢測多個目標蛋白，在檢測*個目標蛋白后，可用酸洗（如0.2MGlycine/0.5MNaCl,pH2.8）2-5min，Tris中和，從而洗脫*個目標蛋白抗體，再進行第二個目標抗體的檢測，Optitran的強韌的高耐受性正好適合這類重復操作的要求。Optitran膜0.45μm和0.2μm兩種孔徑規格提供，除了單位面積zui大載量相對Protran會小一些，其他選擇和使用和Protran都是一樣的。Optitran由于帶有聚酯，通常不推薦用熒光檢測。

尼龍膜
  Nytran SuPerCharge：帶高正電荷的尼龍膜。尼龍膜柔軟，強韌，耐折疊，可耐受強度較高的機械操作，這一點上遠勝于硝酸纖維素膜，并因而廣泛用于膜芯片，Macroarray，或者預制核酸雜交膜上。通常核酸分子在電泳條件下是帶負電，尼龍膜上電荷越高，吸附帶負電的核酸分子的能力越強，不過蛋白質荷電特性與核酸不同，尼龍膜更常見用于Southern或者Northern。Nytran SuPerCharge經過特殊處理，均勻附著在中間介質兩面，表面孔徑均一，電荷量是常規帶正電核酸膜的3倍，對核酸的吸附更強，更重要的是經過特殊處理，克服以往帶電尼龍膜背景高的弱點，能得到良好的信噪比。

    尼龍膜適用于各種轉移方法，如電轉，半干轉，毛細管，堿法等，固定方法是紫外交聯。不過就不太適合化學顯色和熒光檢測。因為尼龍本身有熒光，會干擾結果；而化學顯色劑的微小顆粒容易附著而產生斑點背景。

    Nytran同樣分0.45μm和0.2μm孔徑，分別適合300bp以上或者以下的核酸片段。選擇的標準是看你的核酸大小。

    Nytran N是常規帶正等電荷的尼龍膜。除了荷電小其他特性和差不多，如果你不想要高電荷，這個就是一選擇。